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qPCR試劑盒

Biomarker 2X SYBR Green Fast qPCR Mix

產品名稱

Biomarker 2X SYBR Green Fast qPCR Mix

目錄: RK02001

規格: 500 RXN

濃度: 2X

?產品信息

?產品介紹

Biomarker 2× SYBR Green Fast qPCR Mix是采用SYBR??Green I 嵌合熒光法進行qPCR反應的專用試劑,通過對SYBR??/ FAM通道進行熒光信號定量檢測,可以獲得PCR過程中DNA擴增的真實數據,采用抗體法熱啟動Taq酶進行擴增,在保證擴增效果的同時極大地提高了產品的特異性。

本產品為2×濃度預混液,除引物和模板外,包含了所有qPCR所需成分,為實驗操作提供了極大的便利。

?運輸與保存方式

運輸方式:干冰運輸。

保存方式:-20 °C避光保存。產品有效期2年。

?產品特點

1.兼容性完美,全平臺通用:提供ROX預混版本,適用于所有主流定量PCR儀器。

2.靈敏度高:采用獨特優化的反應Buffer,可檢測低至10 pg的模板。

圖1:將質粒進行8 個10倍梯度稀釋,以5×107 -100?拷貝/μl的質粒為模板,進行擴增。發現Biomarker 2× SYBR Green Fast qPCR Mix擴增效率高,且可獲得良好的線性關系。

3.擴增性能優越短時間內可反復凍融10次以上,擴增效率依然很高。

圖2:以1 μg不同物種的RNA為模板(藍色:人肝癌細胞;青色:雞;紅色:斑馬魚;黑色:水稻種子),用BiomarkerScript Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit進行逆轉錄,得到cDNA產物。再以100 ng不同物種的 cDNA為模板,用反復凍融10次以上的Biomarker 2× SYBR Green Fast qPCR Mix進行qPCR擴增。結果所示:溶解曲線呈現特征單峰。

4.特異性強,適應不同樣本:通過抗體封閉聚合酶活性,有極強的特異性。

圖3:以1 μg不同物種的RNA為模板(紅色:人肝癌細胞;藍色:雞;黑色:斑馬魚;紫色:水稻種子;黃色:番茄果),用BiomarkerScript Ⅱ 1st Strand ?cDNA Synthesis Kit進行逆轉錄,得到cDNA產物。再以100 ng不同物種的 cDNA為模板,用Biomarker 2×SYBR Green Fast qPCR Mix進行qPCR擴增。結果所示:試劑盒可完美識別目標基因擴增,特異性極高。

5.重復性好?:設置20個復孔,S型擴增曲線幾乎重合。

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圖4:以1μg水稻種子的RNA為模板,用BiomarkerScript Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit進行逆轉錄,得到cDNA產物。再以100 ng的?cDNA為模板,設置20個復孔,用Biomarker?2× SYBR Green Fast qPCR Mix進行qPCR擴增。

?產品組分

?產品應用

轉錄組項目文章發表,大部分的驗證都采用了qPCR方案,統計部分百邁客成功案例:人、鼠、家禽、水產、昆蟲、經濟作物、林木、花卉果蔬等。

?FAQ

Q1:Ct值偏大(如Ct值>30)

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1)模板量太低或基因表達豐度低,可適當增加模板量。

2)反應體系中存在雜質抑制了酶的活性,可進行梯度稀釋降低模板量,或者檢查模板的純度,確保模板純度高。

3)若是擴增目的產物過長,建議優化引物,或者采用三步法程序擴增,同時
建議擴增產物長度不超過300 bp。

4)引物設計不當導致擴增效率低,建議優化引物,通過標準曲線確認擴增效率。

Q2:復孔重復性差

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1)誤差導致,建議加樣過程中,使用精密的移液器,且可增大反應體系。

2)儀器長時間未校準,建議實驗開始前,將儀器定期校準。

Q3:擴增曲線未達到平臺期

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1)模板量太低或基因表達豐度低,可適當增加模板量。

2)循環數太少,可適當增加循環數。

Q4:無S型擴增曲線

1)模板量太低、或基因表達豐度低,可適當增加模板量。

2)樣本不純,雜質抑制qpcr擴增反應??梢灾匦绿崛颖?,或制作標準曲線確認樣本質量。

3)非特異性引物導致,建議優化引物,液可以用內參基因做對照確認引物的問題。必要時換新的引物。

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